期刊简介
本刊隶属于中华预防医学会系列杂志。 “以防为主(三级预防)，防治并举”为本杂志的办刊宗旨。主要栏目有流行病学与预防医学、基础研究、临床研究、综述与讲座、技术革新与经验交流、论著摘要与病案报道、域外肿瘤研究信息转载、简讯等。为活跃学术气氛，增加著、读、编者间的交流，本刊还将不定期的设置“学术争鸣”栏目。本刊以从事肿瘤基础研究与临床工作者以及大专院校师生为主要读者对象。
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首页>中华肿瘤防治杂志
- 杂志名称：中华肿瘤防治杂志
- 主管单位：齐鲁肿瘤杂志；肿瘤防治杂志；当代肿瘤学杂志
- 主办单位：国家卫生和计划生育委员会
- 国际刊号：11-5456/R
- 国内刊号：11-5456/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国期刊方阵来源刊 ASPT来源刊 中国期刊网来源刊期刊收录：剑桥科学文摘, 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 知网收录(中), ASPT来源刊, CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
人NKp44基因克隆及其在大肠埃希菌中的表达和纯化
高新谱；刘正敏；王来城；焦玉莲；刘义庆；张雪；赵跃然
关键词：大肠杆菌/分离和提纯, 杀伤细胞, 天然/生理学, 克隆, 分子, 基因表达
摘要：目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础.方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA.用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860 bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析.用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp44重组质粒,分离hNKp44片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp44.转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达的重组蛋白.采用His·Bind Purification Kit对重组蛋白进行纯化.结果:巢式PCR扩增的DNA片段与hNKp44 cDNA大小一致.重组质粒pMD18-T-hNKp44的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp44的cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为35.4×103,其表达量达菌体总蛋白的40%左右.Western Blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His·Tag抗体结合.纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%.结论:已经成功地构建了表达重组hNKp44的工程菌株.
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