期刊简介
本刊隶属于中华预防医学会系列杂志。 “以防为主(三级预防)，防治并举”为本杂志的办刊宗旨。主要栏目有流行病学与预防医学、基础研究、临床研究、综述与讲座、技术革新与经验交流、论著摘要与病案报道、域外肿瘤研究信息转载、简讯等。为活跃学术气氛，增加著、读、编者间的交流，本刊还将不定期的设置“学术争鸣”栏目。本刊以从事肿瘤基础研究与临床工作者以及大专院校师生为主要读者对象。
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首页>中华肿瘤防治杂志
- 杂志名称：中华肿瘤防治杂志
- 主管单位：齐鲁肿瘤杂志；肿瘤防治杂志；当代肿瘤学杂志
- 主办单位：国家卫生和计划生育委员会
- 国际刊号：11-5456/R
- 国内刊号：11-5456/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国期刊方阵来源刊 ASPT来源刊 中国期刊网来源刊期刊收录：剑桥科学文摘, 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 知网收录(中), ASPT来源刊, CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
CRISPR/Cas系统干扰HPV16 E6基因对SiHa细胞增殖和凋亡影响
朱承义；夏薇；魏波；叶望莲；项涛
关键词：人乳头瘤病毒16, E6, 规律间隔的短回文重复序列, 宫颈肿瘤, P53, Siha
摘要：目的 研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 16型的E6病毒癌基因被特异性靶向HPV16-E6位点成簇的、规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)定点敲除后,宫颈癌细胞系SiHa在细胞凋亡和增殖方面的变化.方法 设计靶向HPV16 E6基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),脂质体介导gRNA质粒和Cas9质粒对HPV16阳性人宫颈癌细胞系SiHa和HPV16阴性的正常人胚肾上皮HEK293细胞转染.流式细胞术检测SiHa和HEK293细胞转染前后细胞在凋亡率方面的变化;CCK8法检测转染前后两种细胞的增殖能力变化;蛋白质印迹法检测E6基因敲除后,SiHa细胞中E6蛋白和p53蛋白的表达水平.结果 将靶向HPV16 E6基因的gRNA质粒和Cas9质粒共同转染SiHa细胞48 h后,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞凋亡率为25.6％,与未转染gRNA和Cas9质粒的SiHa细胞空白组(2％)以及只转染等量Cas9质粒的Cas9组(3％)相比明显上升,差异有统计学意义,F=58.500,P＜0.001;而只转染等量Cas9质粒的Cas9组和空白组SiHa细胞的凋亡率差异无统计学意义,P＞0.05.CCK8实验表明,转染72 h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞增殖抑制率为31.3％,细胞增殖抑制明显,P=0.008;转染96 h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组细胞增殖抑制率为30.6％,P=0.002;而不表达HPV16 E6基因的HEK293细胞的增殖能力未被抑制,3组细胞之间增殖能力相比差异无统计学意义,F=0.219,P=0.810.转染48 h后,与空白组相比,SiHa细胞E6蛋白表达下降,E6蛋白表达抑制率为-45.24％,三组之间E6蛋白表达量差异有统计学意义,F=30.392,P＜0.001;与空白组相比,p53蛋白表达上调+250.08％,3组p53蛋白表达量差异有统计学意义,F=50.530,P＜0.001.结论 应用CRISPR特异性地抑制HPV16 E6基因表达可以诱导SiHa细胞凋亡,抑制SiHa细胞增殖,下调E6蛋白并且上调p53蛋白表达.
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