Apatinib抑制套细胞淋巴瘤细胞株增殖与凋亡实验研究

摘要：目的 套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的化疗效果欠佳,亟需开拓新的靶向治疗方式.本研究探讨新一代小分子血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼(Apatinib)对MCL细胞株增殖与凋亡的影响及机制.方法 体外培养MCL细胞株Mino和Z138;CCK8法检测不同浓度下Apatinib对Mino和Z138细胞株的增殖抑制作用;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测不同浓度Apatinib对Mino和Z138细胞株的诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测药物处理后ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和pERK1/2的表达的变化.结果 Aptinib对Mino和Z138细胞株均有明显的增殖抑制作用,呈浓度依赖性.Mino细胞经过Apatinib处理48 h后,2.5 μmol/L的抑制率为(5.72±2.43)％、5μmol/L的抑制率为(8.19±2.2)％、10 μmol/L的抑制率为(17.70±4.01)％、20μmol/L的抑制率为(44.58±7.59)％、40 μmol/L的抑制率为(85.12±2.67)％,IC50为(20.63±0.18) μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组多重比较,差异均有统计学意义,H=22.016,P=0.001.Z138细胞组2.5 μmol/L的抑制率为(7.19±1.71)％、5 μmol/L的抑制率为(10.60±1.43)％、10 μmol/L的抑制率为(20.24±5.93)％、20 μmol/L的抑制率为(53.46±4.91)％、40μmol/L的抑制率为(87.07±1.41)％,IC50为(18.15±0.18) μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=16.460,P=0.006.细胞凋亡结果显示,Apatinib处理Mino细胞48 h后,对照组凋亡率为(4.03±0.99)％、10 μmol/L的凋亡率为(8.10±0.98)％、20 μmol/L的凋亡率为(29.46±7.18)％、30μmol/L的凋亡率为(35.06±4.17)％、40 μmol/L的凋亡率为(50.01±2.14)％.经Kruskal-Wallis H分析表明,处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=13.033,P=0.011.Z138细胞对照组凋亡率为(5.45±1.82)％、10 μmol/L的凋亡率为(10.58±2.74)％、20 μmol/L的凋亡率为(16.51±0.81)％、30 μmol/L的凋亡率为(23.07±3.14)％、40 μmol/L的凋亡率为(34.48±6.40)％,经Kruskal-Wallis H分析,处理组与对照组两两比较,差异有统计学意义,H=13.500,P=0.009.蛋白质印迹法结果显示,Apatinib处理Mino细胞48 h后,ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和ERK1/2表达均有下降.结论 Apatinib可以抑制MCL细胞株Mino和Z138的增殖并有效诱导其发生凋亡,呈浓度依赖性其机制可能是通过干扰ERK1/2通路实现的.