MiR-300对骨肉瘤细胞增殖与凋亡作用研究

摘要：目的 骨肉瘤具有局部高度侵袭能力以及快速转移潜能,因而致死率较高.研究指出,miR-300的表达异常与多种肿瘤的发病相关.miR-300对骨肉瘤细胞是否存在调控作用却属未知.本研究探讨miR-300对骨肉瘤细胞Saos-2增殖与凋亡调控的作用.方法 将miR-300转染进骨肉瘤细胞Saos-2中,实现miR-300在Saos-2细胞内的高表达.通过荧光定量PCR测定miR-300在细胞内的表达水平;分别采用MTT活细胞测试,细胞周期实验和克隆形成实验检测骨髓瘤细胞的增殖情况;通过蛋白质印迹法测定Bcl-2、Bax和Bak,裂解型Caspase-3蛋白水平来鉴定细胞凋亡.结果 转染miR-300的Saos-2细胞,其miR-300表达量为对照组的(10.23±1.04)倍,t=3.613 8,P=0.000 6.MTT实验结果显示,在转染后24和48 h,miR-300组的Saos-2相对活细胞百分比相对对照组分别为[(174.35±28.46)％,t=2.219,P=0.03]和[(225.73±24.62)％,t=2.738,P=o.008].miR-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为39.42％,低于对照组的47.58％,t=2.366,P=0.021;而处在G2期的细胞百分比为19.12％,显著高于对照组的10.55％,t=2.987,P=0.004.miR-300组Saos-2细胞克隆形成率为(52.53±30.21)％,显著高于对照组的(24.67±2.05)％,t=2.711,P=0.008 6.miR-300组Saos-2细胞中Bax、Bak和裂解型Caspase-3表达水平分别为对照组的(0.25±0.02)倍(t=2.785,P=0.007)、(0.31±0.03)倍(t=3.223,P=0.002)和(0.36±0.03)倍(t=3.006,P=0.003 8),差异有统计学意义.Bcl-2蛋白水平为对照组的(6.32±0.57)倍,t=3.218,P=0.002.转染miRZip lent-shMiR-300的Saos-2细胞,其miR-300数量为对照组的(0.28±0.03)倍,t=3.531,P=0.000 78.转染24 h后,miR-300组Saos-2相对活细胞数为对照组的(64.46±5.32)％,t=2.324,P=0.024;48 h后为对照组的(48.14±4.38)％,t=3.009,P=0.004.miR-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为55.71％,高于对照组的46.78％,t=2.108,P=0.039;处在G2期的细胞百分比为2.81％,低于对照组的11.46％,t=3.224,P=0.002.miR-300组的Saos-2细胞的克隆形成率为(17.63±3.89)％,显著低于对照组的(26.84±2.94)％,t=2.989,P=0.004.miR-300组Saos-2细胞中Bax表达水平为对照组的(6.25±4.23)倍,t=3.138,P=0.002 6;Bak表达水平为对照组的(6.03±4.27)倍,t=3.395,P=0.001 2;裂解型Capase-3表达水平为对照组的(5.35±0.37)倍,t=3.017,P=0.003 7;而Bcl-2蛋白水平为对照组的(0.36±0.02)倍,t=2.769,P=0.007 4.结论 miR-300在骨肉瘤细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用,抑制miR-300表达可以一定程度上减少骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,为骨肉瘤的病理机制研究提供了新研究方向.