期刊简介
本刊隶属于中华预防医学会系列杂志。 “以防为主(三级预防)，防治并举”为本杂志的办刊宗旨。主要栏目有流行病学与预防医学、基础研究、临床研究、综述与讲座、技术革新与经验交流、论著摘要与病案报道、域外肿瘤研究信息转载、简讯等。为活跃学术气氛，增加著、读、编者间的交流，本刊还将不定期的设置“学术争鸣”栏目。本刊以从事肿瘤基础研究与临床工作者以及大专院校师生为主要读者对象。
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首页>中华肿瘤防治杂志
- 杂志名称：中华肿瘤防治杂志
- 主管单位：齐鲁肿瘤杂志；肿瘤防治杂志；当代肿瘤学杂志
- 主办单位：国家卫生和计划生育委员会
- 国际刊号：11-5456/R
- 国内刊号：11-5456/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国期刊方阵来源刊 ASPT来源刊 中国期刊网来源刊期刊收录：剑桥科学文摘, 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, 知网收录(中), ASPT来源刊, CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
EGFR靶向HBD-1强化融合蛋白构建及其抗肿瘤活性研究
牛慧；张玉萍；谈洪蕾；刘文娟
关键词：人表皮生因子受体, 力达霉素, β-人防御素, 强化融合蛋白
摘要：目的 人β-防御素1(human defensin-β-1,HBD-1)由上皮细胞分泌,在肿瘤细胞中极少表达,新研究表明它可作为肿瘤的抑制基因.本研究制备以人表皮生长因子受体-1(human epidermal growth factor receptor-1,EGFR-1)为靶点、HBD-1(Db)的力达霉素(lidamycin,LDM)组成的强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db,并探讨其抗肿瘤活性.方法 采用基因工程方法制备融合蛋白基因并将其表达纯化得到融合蛋白Ec-LDP-Db.ELISA和细胞免疫荧光法检测Ec-LDP-Db与肿瘤细胞表面EGFR亲和活性;采用CCK-8法测定Ec-LDP-Db对人肿瘤细胞A431、A549、H460和PG-BE1体外杀伤活性,纯化的Ec-LDP-Db蛋白与LDM发色团(AE)在体外进行组装,构建强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db.采用MTT法检测Ec-LDP(AE)-Db对肿瘤细胞杀伤活性,A431细胞裸鼠移植瘤实验检测Ec-LDP(AE)-Db体内抗肿瘤活性.流式细胞仪检测Ec-LDP(AE)-Db作用后肿瘤细胞的细胞周期变化.结果 成功构建并表达融合蛋白Ec-LDP-Db,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,目的蛋白Ec-LDP-Db经纯化、复性后,每升发酵液可以获得30 mg,检测纯度达到88％.Ec-LDP-Db可与高表达EGFR的A431细胞表面结合.不同浓度的HBD-1和Ec-LDP-Db对A431和H460具有增殖抑制作用,其中10μmol/L Ec-LDP-Db组A431细胞抑制率为(67.3±6.9)％,高于HBD-1组抑制率(13.2±3.7)％,差异有统计学意义,t=1.585,P=0.023;Ec-LDP-Db组H460细胞抑制率为(65.3±2.0)％,高于HBD-1组抑制率(20.5±0.5)％,差异有统计学意义,t=1.895,P=0.045.Ec-LDP-Db蛋白与LDM发色团在体外组装成功后为强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db.MTT法检测结果显示,Ec-LDP(AE)-Db对肿瘤细胞的杀伤作用比顺铂(cisplatin,DDP)强,DDP对A431的IC50值为(303.2±55.6)×10-10 mol/L,而Ec-LDP(AE)-Db对A431的IC50值为(1.9±2.2)×10-10 mol/L,P=0.043.A431裸鼠移植瘤实验同样证实Ec-LDP(AE)-Db在体内也具有更高的抗肿瘤活性,其抑瘤率为77.8％,P=0.008.流式细胞术检测发现,A431细胞Ec-LDP(AE)-Db给药组1 nM时G2期为(79.1±8.7)％,与对照组(2.9±0.8)％相比,差异有统计学意义(P=0.018),因此Ec-LDP(AE)-Db可以促使A431肿瘤细胞G2/M期阻滞.结论 本实验制备的EGFR靶向强化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db可以与高表达EGFR的A431癌细胞结合,对肿瘤细胞具有强烈的杀伤活性,具有发展为抗肿瘤靶向药物的潜能.
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